蛋白酶(Protease)是水解蛋白质肽链的一类酶的总称。蛋白表达纯化时常用HRv3C(HRv3C蛋白酶)、Ulp1(SUMO蛋白酶)、rTEV(重组烟草病毒蛋白酶)等蛋白酶切除蛋白标签。
HRv3C(HRv3C蛋白酶)
经过基因工程改造后的重组蛋白酶
特异性识别:Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro八氨基酸序列
剪切位点:在Gln-Gly之间
含标签:GST标签、His标签
作用后去除方法:GSH树脂或Ni柱
Ulp1(SUMO蛋白酶)
具有较高活性的半胱氨酸蛋白酶
特异性识别:SUMO蛋白的三级结构
含标签:多聚His标签
作用后去除方法:亲和层析
特性:可以高效而且特异性地将SUMO蛋白从重组融合蛋白上切割下来,在较宽范围的反应环境体系中能保持较高的活性,如温度(4-30℃),PH (5.5-9.5)等
rTEV(重组烟草病毒蛋白酶)
经过基因工程改造后的重组蛋白酶
特异性识别:Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe- Gln-Gly 七氨基酸序列
含标签:该酶经 6×His 标签纯化而得(含组胺酸标签),纯度达99%
作用后去除方法:His标签纯化树脂Ni-NTA Resin(Cat.No. P2010)
特性:rTEV 蛋白酶与肠激酶 U(EK)、Thrombin、FactorXa、SUMO 等蛋白酶相比,具有高活性、高特异性的双重特点,rTEV 蛋白酶因具高剪切活性和特异性,已成为融合蛋白表达后去除融合 tag 的首选蛋白酶。
TEV蛋白酶结构
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