蛋白生物学技术服务-Western blot实验

技术原理与实验步骤

免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(western blot)，它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法，具有高分辨力、高特异性和敏感性，是蛋白分析的一种常规技术，可常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。蛋白经过PAGE凝胶电泳及转膜后，添加一抗可与蛋白特异结合，加入标有辣根过氧化物酶的二抗可与一抗结合，最后通过与加有底物的显色液反应，通过化学发光或胶片显色达到检测蛋白的目的。

服务流程

1. 客户提供样品;
2. 提取样品蛋白，测定蛋白浓度，确定上样量；
3. 蛋白进行SDS-PAGE凝胶电泳；
4. 蛋白质转膜；
5. 转膜后用脱脂奶粉封闭，一抗孵育后洗涤并进行二抗孵育；
6. 二抗孵育好后洗涤，化学发光法或胶片显色；
7. 发送结果：蛋白样品及测定浓度、上样量等信息，抗体信息，显色结果及分析。