稳转细胞株构建

技术原理与实验步骤

稳转细胞株构建一般是通过慢病毒方法构建的。构建慢病毒包装需要的表达质粒及包装质粒，用转染试剂将质粒转染到293T等病毒包装细胞中可完成病毒包装。包装好的慢病毒感染细胞后，会将目的表达基因整合到细胞基因组中，实现稳定表达，通过表达载体上的筛选基因如荧光、抗生素等可实现阳性细胞筛选。本公司拥有荧光蛋白Venus、mCherry、mKate、GFP、EYFP等质粒，运用慢病毒包装系统包装慢病毒，感染CHO、Hela、客户需求细胞，可构建用于检测基因表达、蛋白定位相关的荧光蛋白融合细胞株。

参考文献

Monitoring G protein-coupled receptor activation using an adenovirus-based b-arrestin bimolecular fluorescence Q1 complementation assay. Analytical Biochemistry, 2013.

服务流程

1. 客户提供基因信息及需求；
2. 选择合适的表达质粒载体，合适的荧光蛋白，合理的荧光蛋白拆分位点，分子克隆构建质粒；
3. 构建成功的表达质粒与包装质粒共转染293T细胞；
4. 收集病毒，荧光细胞计数法测定病毒滴度；
5. 病毒感染CHO、Hela或客户需求细胞，荧光检测并用流式细胞仪分选；
6. 根据客户对稳转细胞株的要求如体积、细胞数等提供细胞株，附加质粒构建引物、测序结果、细胞荧光检测、流式细胞仪分选结果等信息。